醫學生物學實驗重點

移液管的使用：吸—擦—調—放量取4.5毫升液體用什麼移液管：應該用10ml吸量管（注意看書p5下方吸量管的種類和使用）

微量加樣器的使用：裝吸液頭之後扭一下，保證不漏氣，吸液到第一停止點，緩慢釋放按鈕，停留1s，滑出，擦去吸液頭外面的液體，不擦尖端。放液先到第一停止點，停1s，到第二停止點，放液要貼壁，也是滑出。

分光光度法的原理：Lambert-Beer定律光吸收和什麼因素有關A=-lgT直接比較法（公式法）、標準曲線法。標準曲線法A爲縱座標，濃度爲橫座標，取直線部分作定量依據。

凝膠層析：分子量大的先出，考了一道給了四種蛋白質的分子量，問哪個先出的。還考了一道分離不同分子量的蛋白質用什麼層析的。（親和層析、薄層層析的原理最好也看看吧）

離子交換層析：和後邊的血清γ球蛋白的實驗一起考了好幾道題，等電點的概念還有離子交換層析的原理一定要清楚，題目會變換一下流動相的ph什麼的來考。咱們實驗用的是DEAE—纖維素陰離子交換劑，具有鹼性基團，和流動相中的陰離子進行交換。

離心機的使用：尤其注意平衡哦~根據轉速的離心機的分類低速<6000r/min<高速<25000r/min<超速

各種離心方法：差速離心、密度梯度離心（速度區帶離心、等密度離心）、超速離心，要知道各種離心方法適用於分離什麼。

光學顯微鏡的操作：左眼觀察右眼看圖，左手調焦右手移片或繪圖。低倍鏡轉到高倍鏡需要光圈調大。油鏡也出了一個選項，可以瞅一眼。

蟾蜍軟骨細胞中性紅染色：淡紅色的是細胞核和核仁，玫瑰紅色的是高爾基液泡。

大蒜根尖用鹽酸水解之後爲什麼要用蒸餾水洗3s

亞細胞組分沉降的先後：最先離心出的是細胞核，然後是線粒體，最終上清中是微粒體。沉降速度：細胞核>線粒體>微粒體。細胞核用甲基綠—派洛寧染色，甲基綠染的是DNA，綠色，派洛寧染RNA，紅色。爲什麼用冷玻片？細胞核過酒精是密度由高到低，每次5min。在丙酮中分色時間過長會？詹納斯綠B染線粒體，綠色。

永久製片觀察：鐵蘇木精染線粒體：藍色。鍍銀染色：高爾基體，網狀，深棕色。考馬斯亮藍染微絲束，藍色。DNA的特異顯示方法（feulgen反應）：60°C鹽酸水解使醛基暴露，和Schiff氏試劑（無色亞硫酸品紅）反應成紫紅色化合物。考了一道爲什麼和希夫試劑反應要放在抽屜裏，避光防止變質。胞質被亮綠染成綠色。

乳酸脫氫酶在細胞中的定位分析：乳酸脫氫酶催化乳酸脫氫，傳遞給NAD+,顯色的是四唑鹽被還原成的雙甲?藍紫色沉澱。

糖原同樣是希夫試劑和遊離醛基反應，成爲PAS反應。蘇丹黑染脂類爲黑色。

蛋白質含量的folin—酚法測定：酪氨酸帶有酚基，鹼性條件下與銅離子螯合，使磷鉬酸—磷鎢酸還原生成藍紫色化合物，深淺可用分光光度法測，與蛋白質含量成正比。（考了銅離子和氧化還原反應、空白對照管）

血清γ球蛋白：前一部分初步分離是設計性實驗哦~要提前自己設計，寫實驗報告，實驗之後再寫一份~考了好幾道離子交換柱層析的，改流動相的ph先流出的是哪個蛋白啊，

DEAE—纖維素的處理啊，層析的步驟順序啊，還有用20%磺基水楊酸檢驗蛋白質。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳考了SDS作用、β巰基乙醇的作用、催化劑和引發劑、上下各是正負極、顯色、濃縮膠和分離膠的上下和緩衝液的ph、濃縮膠的作用、分離膠的作用（分

子篩）、氯離子蛋白質甘氨酸的遷移率、垂直板不連續電泳。染色用的是考馬斯亮藍，指示劑用的是溴酚藍。這個實驗考了好多啊，好好看啊~！

血清谷丙轉氨酶活性測定：血清提供的是酶（不是底物不是產物哦~）、丙酮酸和2,4—二硝基苯肼在鹼性條件下生成棕色的丙酮酸二硝基苯腙、活性單位是每毫升血清在ph=7.4,37°C保溫30min每生成2.5μg丙酮酸作爲一個酶活性單位。520nm比色。

唾液澱粉酶透析之後活性下降是缺了什麼。提取酶主要是看酶的比活力還是神馬。。。

其實實驗步驟和原理明白了就好了，還要看看書前面的那些操作使用方法和原理。

量取4.5毫升液體用什麼移液管：應該用10ml吸量管（注意看書p5下方吸量管的種類和使用）

微量加樣器的.使用：裝吸液頭之後扭一下，保證不漏氣，吸液到第一停止點，緩慢釋放按鈕，停留1s，滑出，擦去吸液頭外面的液體，不擦尖端。放液先到第一停止點，停1s，到第二停止點，放液要貼壁，也是滑出。

分光光度法的原理：Lambert-Beer定律光吸收和什麼因素有關A=-lgT直接比較法（公式法）、標準曲線法。標準曲線法A爲縱座標，濃度爲橫座標，取直線部分作定量依據。

凝膠層析：分子量大的先出，考了一道給了四種蛋白質的分子量，問哪個先出的。還考了一道分離不同分子量的蛋白質用什麼層析的。（親和層析、薄層層析的原理最好也看看吧）

離子交換層析：和後邊的血清γ球蛋白的實驗一起考了好幾道題，等電點的概念還有離子交換層析的原理一定要清楚，題目會變換一下流動相的ph什麼的來考。咱們實驗用的是DEAE—纖維素陰離子交換劑，具有鹼性基團，和流動相中的陰離子進行交換。

離心機的使用：尤其注意平衡哦~根據轉速的離心機的分類低速<6000r/min<高速<25000r/min<超速

各種離心方法：差速離心、密度梯度離心（速度區帶離心、等密度離心）、超速離心，要知道各種離心方法適用於分離什麼。

光學顯微鏡的操作：左眼觀察右眼看圖，左手調焦右手移片或繪圖。低倍鏡轉到高倍鏡需要光圈調大。油鏡也出了一個選項，可以瞅一眼。

蟾蜍軟骨細胞中性紅染色：淡紅色的是細胞核和核仁，玫瑰紅色的是高爾基液泡。

大蒜根尖用鹽酸水解之後爲什麼要用蒸餾水洗3s

亞細胞組分沉降的先後：最先離心出的是細胞核，然後是線粒體，最終上清中是微粒體。沉降速度：細胞核>線粒體>微粒體。細胞核用甲基綠—派洛寧染色，甲基綠染的是DNA，綠色，派洛寧染RNA，紅色。爲什麼用冷玻片？細胞核過酒精是密度由高到低，每次3min。在丙酮中分色時間過長會？詹納斯綠B染線粒體，綠色。

永久製片觀察：鐵蘇木精染線粒體：藍色。鍍銀染色：高爾基體，網狀，深棕色。考馬斯亮藍染微絲束，藍色。DNA的特異顯示方法（feulgen反應）：60°C鹽酸水解使醛基暴露，和Schiff氏試劑（無色亞硫酸品紅）反應成紫紅色化合物。考了一道爲什麼和希夫試劑反應要放在抽屜裏，避光防止變質。胞質被亮綠染成綠色。

乳酸脫氫酶在細胞中的定位分析：乳酸脫氫酶催化乳酸脫氫，傳遞給NAD+,顯色的是四唑鹽被還原成的雙甲?藍紫色沉澱。

糖原同樣是希夫試劑和遊離醛基反應，成爲PAS反應。蘇丹黑染脂類爲黑色。

蛋白質含量的folin—酚法測定：酪氨酸帶有酚基，鹼性條件下與銅離子螯合，使磷鉬酸—磷鎢酸還原生成藍紫色化合物，深淺可用分光光度法測，與蛋白質含量成正比。（考了銅離子和氧化還原反應、空白對照管）

血清γ球蛋白：前一部分初步分離是設計性實驗哦~要提前自己設計，寫實驗報告，實驗之後再寫一份~考了好幾道離子交換柱層析的，改流動相的ph先流出的是哪個蛋白啊，DEAE—纖維素的處理啊，層析的步驟順序啊，還有用20%磺基水楊酸檢驗蛋白質。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳考了SDS作用、β巰基乙醇的作用、催化劑和引發劑、上下各是正負極、顯色、濃縮膠和分離膠的上下和緩衝液的ph、濃縮膠的作用、分離膠的作用（分子篩）、氯離子蛋白質甘氨酸的遷移率、垂直板不連續電泳。染色用的是考馬斯亮藍，指示劑用的是溴酚藍。這個實驗考了好多啊，好好看啊~！

血清谷丙轉氨酶活性測定：血清提供的是酶（不是底物不是產物哦~）、丙酮酸和2,4—二硝基苯肼在鹼性條件下生成棕色的丙酮酸二硝基苯腙、活性單位是每毫升血清在ph=7.4,37°C保溫30min每生成2.5μg丙酮酸作爲一個酶活性單位。520nm比色。

唾液澱粉酶透析之後活性下降是缺了什麼。提取酶主要是看酶的比活力還是神馬。。。

其實實驗步驟和原理明白了就好了，還要看看書前面的那些操作使用方法和原理。