生物試劑方
生物試劑篇一:生物試劑配方
生物試劑配方
一,健那綠:1,)1%健那綠:0.5g+50ml生理鹽水
2)1/5000健那綠染液:取1%的健那綠1ml加入49ml生理鹽水=20ml健那綠+980mll生理鹽水
二,吡羅紅甲基綠:A液:1)甲基綠2g+98ml水
2)吡羅紅G5g+95ml水
3)取60ml甲基綠與20ml吡羅紅加入到160ml水,放入棕色瓶備用。
B液:1)乙酸鈉16.4g,加水至1000ml
2)乙酸12ml,加水至1000ml
3)乙酸鈉溶液300ml+稀乙酸200ml+500ml水
吡羅紅甲基綠試劑:A液200ml+B液800ml
三.牙籤消毒:KMno4溶液,取0.1g~0.5g高猛酸鉀溶於100蒸餾水中
四.生理鹽水:0.9%:取9g鹽溶於1000ml水中
五.30%蔗糖溶液:300g蔗糖加水至1000ml
六.1g龍膽紫溶於100ml水,稀釋到500ml,存於棕色瓶中。
七.斐林試劑:甲液:100g氫氧化鈉(NaOH)加水至1000ml
乙液:50gCuSO4加水至1000ml
蘇丹:1g乾粉加95%酒精至1000ml
雙縮脲:A液:同甲液B液:10gCuSO4加水至1000ml
八.澱粉酶:2%:20g酶+980ml水
澱粉3%:30g澱粉+970ml水
蔗糖3%:30g糖+970ml水
過氧化氫(H2O2)3%:100ml(30%H2O2)+900ml水
3.5%FeCl3:35g(Fecl3)+965ml水
15%HCL:202ml(37%HCL)加水至500ml
九.層析液:石油醚+丙酮+苯20:2:1=1000:100:50
生物試劑篇二:生物試劑配製標準操作流程
生物試劑配製標準化操作流程
1.目的
確保試劑配製準確、有效。
2.範圍
試劑研發部芯片組所用的生物試劑。
3.器材與試劑
3.1.器材
電子天平,稱量匙,稱量紙,移液槍,渦旋混合器,掌上離心機,磁力攪拌器,轉子,玻璃棒,1L容量瓶,50ml容量瓶,100ml容量瓶,10ml容量瓶,1L燒杯,100ml燒杯,10ml燒杯,100ml量筒,10ml量筒,0.2μm孔徑濾膜,1ml注射器,1.5ml離心管。3.2.試劑
EDC:1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimideHydrochloride,1-乙基-3-(3-甲基氨基丙基)碳化二亞胺,(191.7),密封、乾燥、-20℃避光密閉保存。MES:2-(N-Morpholino)ethanesulfonicacid,2-(N-嗎啉代)乙磺酸,(213.2),室溫乾燥密閉保存。
Formamide:甲酰胺,(45.041),4℃密閉保存。
10g/mlSalmonDNA:鮭魚精DNA,室溫乾燥密閉保存。
SDS:dodecylsulfate,十二烷基硫酸鈉,(288),室溫乾燥密閉保存。1mol/LNaOH:氫氧化鈉,(40.01),室溫密閉乾燥保存。
檸檬酸三鈉·2H2O:Trisodiumcitrate,dihydrate,(294.1),室溫乾燥密閉保存。NaCl:氯化鈉,(58.44),室溫乾燥密閉保存。1mol/LHCl:鹽酸,(36.5),室溫密閉保存。
4.程序
(20mM,2×)配製:
4.1.1.配製0.1MMES母液
.在乾燥環境中用電子天平稱取1.21524gMES於乾淨的100ml燒杯中。.量取30ml蒸餾水溶解MES固體,加入數滴1mol/LNaOH調節pH至5.1。.把溶液轉移到已經檢查過的50ml容量瓶中,用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次,洗滌液也轉移到容量瓶中,輕輕搖動,用玻璃棒引流,加蒸餾水定容至50ml。
4.1.2.配製20mMMES
.於無菌操作檯內稀釋0.1MMES母液至20mM(2ml0.1M母液+8ml無菌水,即2×),分裝至1.5ml離心管,全程無菌過濾,-20℃保存。
洗液配製:
×SSC(1L)洗液配製:
.在乾燥環境中用電子天平稱取175.3g(3M)NaCl和88.2g(0.3M)檸檬酸三鈉·2H2O於1L的燒杯中。
.量取800ml去離子水溶解NaCl與檸檬酸三鈉·2H2O,加入數滴1mol/LNaOH溶液調pH值至7.0。
.把溶液轉移到已經檢查過的1L容量瓶中,用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次,洗滌液也轉移到容量瓶中,輕輕搖動,用玻璃棒引流,加水定容至1L,分裝後高壓滅菌,室溫密閉存放。%SDS(100ml)配製:
.在乾燥環境中用電子天平稱取10gSDS。.量取80ml去離子水加熱溶解10gSDS。
.待溶液冷卻至室溫,加入數滴1mol/LHCl調pH至7.2。
.把溶液轉移到已經檢查過的100ml容量瓶中,用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次,洗滌液也轉移到容量瓶中,輕輕搖動,用玻璃棒引流,加水定容至100ml,室溫密閉存放。×SSC(1L)洗液配製:
.加入800ml去離子水加熱溶解。
.待溶液冷卻至室溫,加入數滴1mol/LHCl調pH至7.0-7.2。
.把溶液轉移到經檢查過的1L容量瓶中,用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次,洗滌液也轉移到容量瓶中,輕輕搖動,用玻璃棒引流,加水定容至1L,室溫密閉存放。
×SSC(1L)洗液配製:
.量取10ml20×SSC與10ml10%SDS於1L的燒杯中。.加入800ml去離子水加熱溶解。
.待溶液冷卻至室溫,加入數滴1mol/LHCl調pH至7.0-7.2。
.把溶液轉移到經檢查過的1L容量瓶中,用少量蒸餾水洗滌燒杯和玻璃棒2-3次,洗滌液也轉移到容量瓶中,輕輕搖動,用玻璃棒引流,加水定容至1L,室溫密閉存放。
(10×)配製:
4.3.1.在乾燥環境中用電子天平精密稱取適量的EDC粉末於離心管中。4.3.2.按EDC(mg):滅菌水(ml)=1:5的`比例向裝有EDC粉末的離心管中精確加入滅菌水。
4.3.3.將裝有EDC粉末和滅菌水的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻,然後於離心機上離心,室溫放置(現用現配)。
(2×)配製:
4.4.1.方法一:
.用適當規格的移液槍按以下體系依次準確移取試劑於離心管中。
20×SSC10%SDSFormamide
10mg/mlSalmonDNA滅菌水
2.5ml200μl5ml100ul2.2ml
.將裝有樣品的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻,然後於離心機上離心。
.於無菌操作檯分裝HB至1.5ml離心管中,-20℃保存備用。4.4.2.方法二:
.在乾燥環境下用電子天平精確稱取0.8765gNaCl和0.441g檸檬酸三鈉·2H2O於10ml燒杯中,加入不超過5ml(約3ml)滅菌水,用玻璃棒攪拌,待溶解後調節PH至7.0。
.在乾燥環境下用電子天平精確稱取0.02gSDS和0.001g鮭魚精DNA於燒杯中。
.用1000ul移液槍準確移取5mlFormimade於燒杯中,玻璃棒攪拌均勻。.將燒杯中的液體轉移至10ml容量瓶,用少量滅菌水洗滌燒杯和玻璃棒2~3次,洗滌液也轉移至容量瓶中,輕輕搖動,用玻璃棒引流,加滅菌水定容至10ml。
.於無菌操作檯分裝HB至1.5ml離心管中,-20℃保存備用。
4.5.模板點樣液配製
4.5.1.按以下體系移取試劑於離心管中。
EDCMESDNA(100μM)H2OTotal
1μl5μl1μl3μl10μl
DNA終濃度10μM。
4.5.2.將裝有樣品的離心管豎直放置在渦旋混合器上混合均勻,然後於離心機上離心,室溫放置待用。
生物試劑篇三:常用生物試劑配製方法
常用生物試劑配製方法(buffer)
實驗室各種緩衝液的配方
電泳緩衝液
50×Tris-乙酸(TAE)緩衝液終濃度配製1L溶液
成分各成分的用量
2mol/LTris鹼242g
1mol/L冰乙酸57.1ml
EDTA(pH=8.0)18.622g(200ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0))水補足1L
5×Tris-硼酸(TBE)緩衝液
成分及終濃度配製1L溶液各成分的用量
445mmol/LTris鹼54g
445mmol/L硼酸鹽27.5g硼酸
10mmol/LEDTA20ml的0.5mol/LEDTA(pH8.0)水補足1L
染料
1%溴酚藍(bromophenolblue)
加1g水溶性鈉型溴酚藍於100ml水中,攪拌或渦旋混合直到完全溶解。
1%二甲苯青FF(xylenecyanoleFF)
溶解1g二甲苯青FF於足量水中,定容到100ml。
10mg/ml的溴化乙錠(ethidiumbromide)
小心稱取1g溴化乙錠,轉移到廣口瓶中,加100ml水,用磁力攪拌器攪拌直到完全溶解。用鋁箔包裹裝液管,於4℃貯存。
凝膠上樣液(gelloadingsolutions)
6×鹼性凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量
0.3N氫氧化鈉300ul10N氫氧化鈉6mmol/LEDTA120ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
18%聚蔗糖(400型)1.8g
0.15%溴甲酚綠15mg
0.25%二甲苯青FF25mg
水補足到10ml
6×聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚藍1.5ml1%溴酚藍
0.15%二甲苯青FF1.5ml1%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
15%聚蔗糖(400型)1.5g
水補足到10ml
6×溴酚藍/二甲苯青/聚蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量
0.25%溴酚藍2.5ml1%溴酚藍
0.25%二甲苯青FF2.5ml1%二甲苯青FF
15%聚蔗糖(400型)1.5g
水補足到10ml
6×甘油凝膠上樣液(4℃貯存)
成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚藍1.5ml1%溴酚藍
0.15%二甲苯青FF1.5ml1%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
50%甘油3ml
水3.9ml
6×蔗糖凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量
0.15%溴酚藍1.5ml1%溴酚藍
0.15%二甲苯青FF1.5ml1%二甲苯青FF
5mmol/LEDTA100ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
40%聚蔗糖4g
水補足到10ml
10×十二烷基硫酸鈉/甘油凝膠上樣液(室溫貯存)
成分及終濃度配製10ml溶液各成分用量
0.2%溴酚藍20mg
0.2%二甲苯青FF20mg
200mmol/LEDTA4ml0.5mol/LEDTA(pH8.0)
0.1%SDS100ul10%SDS
50%甘油5ml
水補足到10ml
0.5mol/LEDTA:配製等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合後形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH(調節pH=8.0),並溶於水中,定容至1L。
0.5mol/LEDTA:配製等摩爾的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合後形成EDTA的三鈉鹽。或稱取186.1g的Na2EDTA"2H2O和20g的NaOH,並溶於水中,定容至1L。1mol/LMgCl2:溶解20.3gMgCl2"6H2O於足量的水中,定容到100ml。
10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-freeRNase):溶解10mg的胰蛋白RNA酶於
1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH5.0)。溶解後於水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調pH至7.5,於-20℃貯存。(配製過程中要戴手套)
10N氫氧化鈉(NaOH):溶解400g氫氧化鈉顆粒於約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),氫氧化鈉完全溶解後用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。
10×標準DNA連接酶緩衝液(standardDNAligasebuffer)(粘端、平端連接)成分及終濃度配製10ml溶液各成分的用量
0.5mol/LTris-HCl:5ml1mol/L貯液,100mmol/LMgCl2:1ml1mol/L貯液,100mmol/LDTT:1ml1mol/L貯液,2mmol/LATP:200ul100mmol/L貯液,5mmol/L鹽酸亞精胺(可選):50ul1mmol/L貯液,0.5mg/mlBSA(組分V)(可選):0.5ml10mg/mL貯液,水:2.25ml將配製好的緩衝液分裝成小份,貯存於-20℃。
DEPC(焦碳酸二乙酯)處理水
加100ulDEPC於100ml水中,使DEPC的體積分數爲0.1%。在37℃溫浴至少12h,然後在15psi條件下高壓滅菌20min,以使殘餘的DEPC失活。DEPC會與胺起反應,不可用DEPC處理Tris緩衝液。
TE(用於懸浮和貯存DNA)
成分及終濃度配製100ml溶液各成分的用量
10mmol/LTris-HCl1ml1mol/LTris-HCl(pH7.4(轉載於:mol/LEDTA200ul0.5mol/LEDTA(pH8.0)
水98.8ml
Tris緩衝液(Tris-HClbuffer)
將121g的Tris鹼溶解於約0.9L水中,再根據所要求的pH(25℃下)加一定量的濃鹽酸(11.6N),用水調整終體積至1L。
濃鹽酸的體積(ml)pH
8.69.0
148.8
218.6
28.58.4
388.2
468.0
567.8
667.6
71.37.4
767.2
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